t-spot検査の判定基準と臨床での活用法

t-spot検査の基礎知識と核心ガイド

t-spot検査とは何を測定する検査か

t-spot検査は、結核菌特異的インターフェロンγ遊離試験であるIGRAの一つです。正式な検査名としてT-SPOT.TB、国内ではT-スポット.TBなどの表記が使われます。採取した末梢血から単核球を分離し、細胞数を調整したうえで結核菌特異抗原に反応させ、インターフェロンγを産生した細胞をELISPOT法でスポットとして検出します。血液中の結核菌そのものや、結核菌に対する抗体を測定する検査ではありません。

参考）https://www.kekkaku.gr.jp/pub/pdf/Interferon-gamma_release_test.pdf
使用する主な抗原はESAT-6とCFP-10です。結核菌への感染によって感作されたT細胞が、これらの抗原刺激に反応することを利用しています。BCGおよびほとんどの非結核性抗酸菌の影響を受けにくいため、BCG接種歴がある患者の感染評価で有用です。ただし、Mycobacterium kansasii、M. marinum、M. szulgaiなど一部の非結核性抗酸菌では反応する可能性があり、「結核菌以外では絶対に陽性にならない」と説明するのは適切ではありません。

臨床で最も重要なのは、感染と発病を区別することです。t-spot検査が陽性でも、潜在性結核感染症と活動性結核を検査単独で区別することはできません。また、感染した時期や感染源も特定できません。陽性という結果は、症状、接触歴、結核の既往、胸部画像などと組み合わせて解釈する必要があります。

潜在性結核感染症、いわゆるLTBIは、結核菌への感染があるものの、活動性結核を発病していない状態です。LTBIには他者への感染性がありませんが、将来の発病リスクがあります。一方、活動性結核の有無や感染性は別途評価する必要があります。この区別を説明しないまま陽性結果だけを伝えると、患者が「結核を発病している」「家族にうつす」と誤解するおそれがあります。

参考）https://www.hokeniryo.metro.tokyo.lg.jp/documents/d/hokeniryo/r4_ltbi
日本結核・非結核性抗酸菌症学会「インターフェロンγ遊離試験使用指針2021」

陽性・陰性・判定保留の読み方

t-spot検査では、抗原Aと抗原Bの各ウェルで測定したスポット数から、陰性コントロールのスポット数を差し引いて反応値を求めます。したがって、抗原ウェルに見られたスポット数を、そのまま判定基準に当てはめてはいけません。結果報告書では、補正後の抗原反応値、陰性コントロール、陽性コントロール、最終判定を確認します。

国内の判定を理解するうえでは、単純な陽性・陰性の区分と、境界域に付記される「判定保留」を分けて把握することが重要です。日本結核・非結核性抗酸菌症学会の2021年使用指針では、反応値の高いほうが6以上を陽性、5以下を陰性とする基準を示しつつ、5・6・7では信頼性がやや低下する可能性があるため、判定保留として再採血による検査を推奨しています。実際の診療では、使用製品の最新添付文書と委託検査機関の報告様式を確認してください。

項目	基準・内容	備考
抗原反応値	抗原AまたはBのスポット数から陰性コントロールのスポット数を差し引く	生のスポット数と補正後の値を混同しない。
陽性	抗原反応値のいずれかが8スポット以上	結核感染を疑うが、活動性結核の確定ではない。
陽性・判定保留	抗原反応値の高いほうが6または7スポット	境界域として再採血による検査を推奨する。
陰性・判定保留	抗原反応値の高いほうが5スポット	単なる陰性として処理せず、再検査と患者背景の評価を行う。
陰性	抗原反応値が両方とも4スポット以下	対照が成立していることを確認し、曝露時期や免疫状態も考慮する。
判定不可	陰性コントロールが10スポット超、または陽性コントロールが20スポット未満	学会指針に示された対照の基準。感染の有無を判定できないため再評価する。

計算例として、陰性コントロールが1スポット、抗原Aが8スポット、抗原Bが3スポットであれば、補正後の反応値はAが7、Bが2です。対照が成立している場合、学会指針の区分では「陽性・判定保留」に該当します。抗原Aの生の値が8だから通常の陽性と考えるのではなく、陰性コントロールを差し引いた値で読むことがポイントです。

判定保留と判定不可は異なります。判定保留は抗原反応が境界域にある状態ですが、判定不可は対照の結果などから感染の有無を判断できない状態です。再検査でも判定保留となる場合は、同じ検査を漫然と繰り返すのではなく、他の診断方法や接触状況、症状、免疫状態を踏まえて総合的に判断します。

採血・保存・搬送で押さえる実務

t-spot検査は生きた細胞の反応を利用するため、採血後の検体管理が重要です。採血管、必要量、保存温度、採血から検査開始までの期限を、依頼先の検査案内で確認します。採血量は年齢、細胞分離方法、使用試薬、委託先によって異なるため、すべての施設で同じ量が必要とは限りません。

学会の2021年使用指針では、通常のヘパリン採血管を用いる場合、成人および10歳以上の小児は6mL以上という手技が記載されています。一方、T-Cell Select試薬を用いる方法では、成人および2歳以上の小児で3.5mL以上が推奨されています。これに対し、BMLの公開検査案内ではヘパリン加血10.0mLを必要量として示しています。原理上の推奨量と、委託検査としての提出条件を混同しないことが大切です。

• 採血管は依頼先の指定に従い、t-spot検査用として指定されたヘパリン加血などの条件を確認する。




• 学会指針では採取検体を18～25℃で保管する。BMLの案内でも室温保存、冷蔵厳禁とされており、他の検査と一緒に冷蔵搬送しない。




• 採血日時と回収予定を確認し、細胞処理を開始する期限までに検査機関へ到着できるよう調整する。




• 休日や連休前は回収・検査日程を確認し、採血後に検体が長時間滞留しないようにする。




参考）結核菌IFN-γ測定(T-SPOT.TB)(判定結果およびス…

• 必要量を確保できない場合や提出条件を逸脱した場合は、自己判断で提出せず、検査室または委託先に対応を確認する。

処理期限については、「t-spot検査は必ず採血後32時間以内」と一律に覚えるのは不正確です。学会指針では、採血後8時間を超えて検査を開始する場合にT-Cell Xtendを添加し、32時間までに開始する手順が示されています。また、T-Cell Selectを使用する場合は54時間までに検査を開始する方法が記載されています。どの条件が適用されるかは検査機関の方法によるため、採血現場で独自に期限を延長してよいという意味ではありません。

結果が返却されるまでの所要日数も、測定そのものの時間とは区別します。BMLの公開案内では所要日数は4～5日ですが、回収日、搬送、休日などによって実際の返却時期は変わります。患者には施設で確認した日程を伝え、判定保留や判定不可の場合には再採血が必要になる可能性も説明しておくと、追加検査への理解につながります。

BML「結核菌IFN-γ測定（T-SPOT.TB）」検査案内

接触者健診と免疫抑制治療前の活用

t-spot検査の主な活用場面には、結核患者の接触者健診、LTBI治療の適応評価、医療従事者の健康管理、活動性結核の補助診断があります。免疫抑制作用のある薬剤を使用する前のスクリーニングでも用いられます。ただし、検査結果だけで治療方針を決めるのではなく、結核への曝露可能性と、感染していた場合の発病リスクを分けて評価します。

接触者健診では、採血時期が結果の意味を大きく左右します。結核菌への感染後、IGRAが陽性となるまでには一般に2～3か月程度を要するため、曝露直後の陰性結果では感染を除外できません。東京都のマネジメントガイドでは、通常はこの期間を経て検査を行い、曝露期間が長い場合や同一環境で発病者が多数発生している場合などには、直後と2～3か月後の2回検査を行う場合があるとしています。

例えば、結核患者との最終接触から2週間後に医療従事者のt-spot検査が陰性だったとしても、それだけで健診終了とは判断できません。最終接触日、感染源患者の感染性、接触時間、防護具の使用状況などを整理し、保健所や感染対策部門と再検査時期を調整します。一方、本人に結核を疑う症状や画像異常がある場合には、IGRAの陽転を待たずに活動性結核の評価を進めます。

生物学的製剤、副腎皮質ステロイド、その他の免疫抑制薬を使用する患者では、感染があった場合の発病リスクに加え、免疫低下による検査反応の減弱にも注意します。T-SPOTは反応させる細胞数を調整する方式ですが、「免疫抑制状態でも必ず正確に判定できる」という意味ではありません。学会指針でも、疾患の病状や薬剤の種類・投与量により影響が異なるため、個々の症例で慎重に解釈する必要性が示されています。

医療従事者の健康管理では、過去の結核診療歴、結核患者への曝露、高まん延国での生活歴、配属先の業務リスクなどを踏まえて検査を位置づけます。低リスク者の予想外の陽性や、閾値付近の陽転・陰転をすべて新規感染と即断することは避けるべきです。IGRAは短期間でも結果が変動することがあり、以前の報告書や採血条件、曝露歴を比較した評価が重要です。

結果判明後の対応と患者への説明

t-spot検査が陽性の場合、まず活動性結核の有無を評価します。症状と胸部X線を確認し、所見や臨床状況に応じて胸部CTなどの追加評価を検討します。東京都のマネジメントガイドでは、LTBI治療開始に当たって、活動性結核がないことと過去の結核病変を確認する目的で胸部X線を実施するとしています。陽性だから直ちにLTBI治療を開始するのではなく、発病の評価を先に行うことが基本です。

活動性結核が疑われる場合、t-spot検査はあくまで補助的な情報です。陽性でも過去の感染を反映している可能性があり、陰性でも活動性結核を否定できません。特に高齢者や免疫抑制状態では感度低下に注意が必要です。結核を疑う患者で気管支鏡検査を行う場合についても、学会指針は空気感染対策を行ったうえでの検査が望ましいとしています。IGRA陰性を理由に、必要な診断や感染対策を省略してはいけません。

活動性結核が否定され、LTBIとしての対応を検討する場合は、最近の感染、免疫抑制、透析、臓器移植などの発病リスクに加え、薬剤の副作用、治療完了の見込み、発病した場合の影響を評価します。治療の必要性や方法は患者ごとに判断し、感染源の薬剤耐性が判明している場合は専門医と相談します。陽性者全員に同じ説明や同じ方針を機械的に適用するのではなく、患者背景を踏まえることが重要です。

患者への説明では、「この検査は結核菌に対する免疫反応を調べています。陽性でも、今結核を発病しているか、周囲の人にうつす状態かは、この結果だけでは分かりません。症状や画像検査などを合わせて確認します」と伝えると、感染と発病の違いを理解してもらいやすくなります。LTBIと判断された場合は、現時点では他者への感染性がないことと、治療は将来の発病リスクを下げるために行うことを分けて説明します。

陰性の場合も「結核は絶対にありません」と断定せず、検査時期や免疫状態によって感染を捉えられない場合があることを説明します。判定保留では「反応が境界域にあり、確認のため再検査が必要」、判定不可では「検査の対照条件などが成立せず、感染の有無を判断できなかった」と説明を分けます。結果の意味を正確に伝えることで、再検査や追加評価の必要性を患者と共有できます。

なお、t-spot検査を結核治療の効果判定や治癒判定に用いることは適切ではありません。治療後に反応値が低下する場合はありますが、菌の陰性化と一致しないことがあり、治療経過のモニターには使えないと学会指針に記載されています。治療後も陽性が続くことだけを理由に治療失敗と判断したり、陰性化だけを理由に治癒と判断したりしないことが必要です。

東京都「潜在性結核感染症マネジメントガイド」令和5年3月改正

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